Composizione chimica in acciaio inox 347 A magnitudine di u sangue venoso o capillare, specificu per SARS-CoV-2, e risposte di e cellule T determina l'immunità à COVID-19.

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347 cumpusizioni chimica in acciaio inox

Composizione chimica di tubu di bobina in acciaio inox 347

A cumpusizioni chimica è e proprietà meccaniche di u tubu di bobina in acciaio inox 347 sò i seguenti:
- Carbon - 0,030% max
- Cromu - 17-19%
- Nickel - 8-10,5%
- Manganese - 1% max

Pruprietà meccanica di u tubu di bobina in acciaio inox 347

Sicondu u fabricatore di tubi in bobina in acciaio inox 347, proprietà meccaniche di u tubu in bobina 347:
- Forza di Tensile (psi) - 75.000 min
- Rendimentu (psi) - 30.000 min
- Allungamentu (% in 2″) - 25% min
- Durezza Brinell (BHN) - 170 max

Applicazioni è Usi di Tubi di bobina in acciaio inox 347

• Tubu di bobina d'acciaio inossidabile 347 utilizatu in Sugar Mills.
• Tubu di bobina in acciaio inox 347 utilizatu in Fertilizanti.
• Tubu di bobina in acciaio inox 347 utilizatu in l'industria.
• Tubu di bobina d'acciaio inossidabile 347 utilizatu in Centrali Elettriche.
• Tubu di bobina d'acciaio inossidabile 347 utilizatu in l'alimentariu è u lattice.
• Tubu di bobina d'acciaio inossidabile 347 utilizatu in a pianta di petroliu è di gasu.
• Produttore di tubi in bobina d'acciaio inossidabile 347 utilizatu in l'industria navale.

E cellule T specifiche per SARS-CoV-2 sò pensate per pruteggiri contra l'infezzione è a progressione di COVID-19, ma ùn ci hè micca evidenza diretta per questu.Quì, avemu paragunatu e misurazioni di sangue interu di e cellule T positivi di interferone-γ specificu SARS-CoV-2 cù risultati di test diagnostichi COVID-19 pusitivi (PCR è / o flussu laterale) in 6 mesi da a raccolta di sangue di Lian.Trà i participanti 148 chì anu donatu campioni di sangue venoso, a magnitudine di a risposta di e cellule T specifichi SARS-CoV-2 era significativamente più altu in quelli chì sò stati prutetti cà in quelli chì eranu infettati (P ​​<0.0001).% risicu d'infezzione, mentre chì l'alta intensità riduce stu risicu à 5,4%.Questi risultati sò stati generalizati à un altru 299 participanti chì anu pruvatu un analisi di sangue capillare scalable chì puderia facilità l'accessu à e dati di l'immunità di e cellule T di a pupulazione (14.9% versus 4.4%).Cusì, a misurazione di e cellule T specifiche per SARS-CoV-2 pò predichendu u risicu di l'infezzione è deve esse evaluata quandu monitore u statu immune di l'individuu è di a pupulazione.
Misurà è capisce a risposta immune à l'infezzione SARS-CoV-2 hè impurtante per sviluppà strategie future efficaci per minimizzà l'impatti di salute publica è ecunomichi di futuri epidemie COVID-19.L'identificazione di correlati immune furnisce infurmazioni impurtanti nantu à a suscettibilità di a pupulazione à l'infezzione virali, possibbilmente avvisu precoce di l'ospitalità di punta, è ancu permette à e persone di gestisce personalmente u so risicu di infezzione è u risicu di infettà l'altri.A sorveglianza immune hè dimustrata critica per valutà l'efficacità di i vaccini COVID-19 in pazienti sani è à risicu altu1,2,3 in particulare in mutanti SARS-CoV-24, è a rilevazione di immunocompromessi significarà a necessità di rinfurzà l'immunità Vaccinati è prevene. future epidemie.
U livellu di l'immunità di l'individuu à l'infezione SARS-CoV-2 dipende da parechji fatturi: carica virali à u mumentu di l'esposizione, varianti di virus, età, status di vaccinazione / infezzione precedente, comorbidità, medicazione è, più impurtante, infezione anti-SARS-CoV. .2 A risposta immune adattativa si trova à u mumentu di l'esposizione à u virus5.A valutazione di a risposta immune à l'infezzione SARS-CoV-2 è / o a vaccinazione hè stata cuncentrata nantu à l'analisi serologica chì misuranu a presenza di anticorpi specifichi per una proteina strutturale (per esempiu, spike glycoprotein).Tuttavia, a prisenza o l'assenza di anticorpi solu ùn determina micca precisamente una risposta immune protettiva, postu chì e risposte sò significativamente attenuate cù u tempu6 è a neutralizazione di e varianti SARS-CoV-2 in individui in ricuperazione o doppia vaccinazione. numeru di infezioni avanzate 7.Infatti, a prutezzione contra a COVID-19 sintomatica causata da a variante Omicron (B.1.1.529) hè diminuita à circa 10% dopu solu 4-6 mesi di vaccinazione mRNA, ancu s'è a prutezzione contra a malatia severa persiste > 68% per almenu 7 mesi8.A misurazione di e risposte di e cellule T di memoria adattativa, chì cunferiscenu una prutezzione à longu andà contr'à l'infezzione virali, hè u megliu indicatore di suscettibilità à l'infezzione SARS-CoV-2, è dunque una megliu indicazione di u risicu di pruvà pusitivu per COVID-199, postu chì T specificu. e cellule pò prevene l'infezzione.senza seroconversione10,11.In ogni casu, a misurazione di e risposte di e cellule T hà ricivutu menu attenzione per via di difficultà metodologiche è di prublemi logistichi in l'ottenimentu è u trasportu di campioni di sangue venoso, soprattuttu quandu anu realizatu grandi studii d'osservazione per valutà l'efficacità di a vacuna è monitorà l'immunità.Tuttavia, l'individui vaccinati mostranu una robusta attività di e cellule T contr'à e varianti SARS-CoV-2, cumpensendu potenzialmente a perdita di reattività di l'anticorpu per limità a gravità di COVID-1912,13.
Quì, avemu cercatu di capisce se una sola misurazione di a risposta di e cellule T SARS-CoV-2 puderia predichendu u risicu assolutu di l'infezione SARS-CoV-2 in 6 mesi di campionamentu di sangue, indipendentemente da i fattori chì influenze l'immunità.Per fà a prova di e cellule T à un altu rendimentu è applicabile à studii più grandi, avemu ancu pruvatu à fà a prova miniaturizzata in modu chì pò esse realizatu utilizendu un campione di sangue capillare da u dito.
Avemu misuratu risposti immune cellulari è umorali in donatori sani utilizendu una rilevazione cumminata di cellule T SARS-CoV-2 è anticorpi IgG basati in sangue venoso sanu (per e caratteristiche di i participanti, vede March 2022 14. In donatori vaccinati, SARS-CoV-2-). risposti T-cellulari specifichi sò stati determinati da a misurazione di i livelli di l'interferon-γ (IFN-γ) di plasma dopu à l'estimulazione di u sangue tutale cù u peptide SARS-CoV-2 (cum'è prima, refs. 14,15,16,17,18) è risposti IgG assuciati. cù nucleocapsid (N) anu aumentatu in quelli chì anu riportatu una infizzione previa, ancu s'è e duie risposti eranu più altu in donatori micca vaccinati previamente infettati, massimu in u corpu (Fig. 1a, b). Risposte IgG contr'à spike glycoproteins (RBD, S1, S2) eranu più altu in i donatori vaccinati infettati prima (Figura 1c-e).
una risposta di l'IFN-γ+ T specificu di SARS-CoV-2 hè stata misurata da analisi venosa di sangue tutale è basata nantu à i vaccinazioni di i participanti è u statutu di l'infezione SARS-CoV-2 precedente (cunfirmatu da PCR è / o test di flussu laterale) 'Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 82 (blu), 'Vac-/Inf +' n = 4 (giallo), 'Vac-/Inf-' n = 1 (micca applicata).Le reazioni di legame IgG specifiche per SARS-CoV-2 mirano a nucleocapside ("N") (b; ****P <0,0001, **P = 0,0016), domini di legame ai recettori puntati ("RBD") (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), subunità spike 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0.012) è a subunità di punta 2 ("S2") (e) hè stata misurata da testi di sangue venoso è basatu annantu à a vaccinazione di i participanti è a prima SARS -CoV-2 (cunfirmata da PCR è/). o test di flussu laterale) statu infettivu."Vac + /Inf +" n = 60 (verde), "Vac + /Inf-" n = 71-82 (blu), "Vac-/Inf +" n = 4 (giallo).I paraguni sò stati fatti cù a prova Kruskal-Wallis, aghjustatu per parechje paraguni cù a prova Dunn.I dati sò affissati cum'è grafici (linea centrale à a mediana, limitu superiore à u 75 percentile, limitu minimu à u percentile 25) cù i baffi à i valori minimi è massimi.Ogni puntu rapprisenta un donatore.I dati crudi sò furniti in forma di schedarii di dati crudi.
Dopu u campionamentu di sangue, i participanti sò stati dumandati à auto-riportà risultati di PCR pusitivi è / o di teste di flussu laterale per COVID-19;se i participanti anu testatu pusitivu trà u 1 di settembre 2021 è u 29 di dicembre di u 2021, sò stati presumiti infettati da a variante di coronavirus Delta (B.1.617.2) è Omicron (B.1.1.529) à Public Health Wales dopu u 29 dicembre 2021, quandu sta opzione di preoccupazione diventa dominante.Trà 148 donatori valutabili, avemu osservatu un tassu d'infezione di 26.3% (39/148) in 6 mesi di donazione di sangue, 38 di i quali anu ricevutu una seconda o terza dosa di a vacuna COVID-19 (u scontru di l'infezione hè accadutu dopu à Pfizer / BioNTech ( BNT162b2) vaccinu mRNA o vaccinu AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));un donatore micca vaccinatu hè statu ancu infettatu.A magnitudine di risposti di cellule T IFN-γ-positivi specifiche per SARS-CoV-2 era significativamente più bassa in quelli chì anu riportatu un test diagnosticu pusitivu per COVID-19 cà in donatori micca infettati (P ​​<0.0001; Fig. 2a), principalmente per via di induzione ottimali di risposti di e cellule T da vaccinazione in certi participanti (P ​​= 0.050; Supplementary Fig. 1).Il n'y avait aucune corrélation entre l'amplitude de la réponse des cellules T IFN-γ+ et le temps avant un résultat positif au test COVID-19 (Figura 2 supplémentaire).In cuntrastu, nè RBD-, S1-, S2-binding IgG responses (Figures 2b-d) nè RBD-, S1-neutralizing antibody responses were specific for wild-type or delta SARS-CoV-2 (B.1.617).) (Figura Supplementaria 3) ponu distingue trà e persone in risicu di infezzjoni.In ogni casu, risposti IgG bassu N-linked contr'à SARS-CoV-2 correlated with the risk of COVID-19 infection (P = 0.0084; Figura 2e);quelli chì anu pruvatu pusitivu eranu 85% menu prubabile (P = 0.00035; OR 0.15, 95).% CI: 0.047-0.39 (Figura supplementaria 4).
I campioni di sangue venoso da donatori sani (n = 148) anu valutatu i risposti specifichi di l'IFN-γ+ T-cell SARS-CoV-2 (a; ****P < 0,0001) è u ligame di u receptore Spike à u SARS-CoV specificu -2 stimulus.duminiu ("RBD") (b), subunità di punta 1 ("S1") (c), subunità di punta 2 ("S2") (d), è nucleocapside ("N") (e; **P = 0,0084) .I participanti chì anu testatu pusitivu per COVID-19 (PCR è / o flussu laterale) identificati;tutte l'infizzioni sò accaduti in 6 mesi da u prelievu di sangue.I paraguni sò stati fatti cù una prova di Mann-Whitney à duie code.I dati sò affissati cum'è grafici (linea centrale à a mediana, limitu superiore à u 75 percentile, limitu minimu à u percentile 25) cù i baffi à i valori minimi è massimi.Ogni puntu rapprisenta un donatore.ns ùn hè micca impurtante.A heatmap f mostra a correlazione di u rangu di Spearman trà e variàbili per u dataset specificatu.I paraguni chì ùn sò micca stati statisticamente significativi sò stati esclusi da a matrice è marcati cù cellule in biancu.I dati crudi sò furniti in forma di schedarii di dati crudi.
U cutoff di diagnosticu pusitivu predeterminatu di 14 hè statu cunsideratu troppu arbitrariu per valutà u risicu di reinfezzione, cusì intervalli interquartili sò stati stabiliti per stabilisce parametri di risicu assolutu.U mudellu statisticu, chì includeva solu variabili chì anu avutu un effettu significativu nantu à i risultati, hà dimustratu chì a magnitudine di a risposta di l'IFN-γ+ T specificu di SARS-CoV-2 era u biomarcatore immune più impurtante per a determinazione di e probabilità di l'individuu di esse. testatu per COVID.-19 pusitivu (Figura 2f è Figura Supplementary 4).Pacienti cù un SARS-CoV-2 specificu IFN-γ+ T cell risposta in u terzu (194-489 pg/ml IFN-γ) è quartu (> 489 pg/ml IFN-γ) quartile 65% (P = 0,055); OR 0,35, 95% CI: 0,11-1,00) è 90% (P = 0,0050; OR 0,098, 95% CI: 0,014-0,42) anu più participanti.I chance sò slim (Supplementary Fig. 4).In generale, i participanti cù una risposta specifica di e cellule T SARS-CoV-2 da sangue venoso ≤79 pg/mL IFN-γ anu avutu un risicu di 43,2% di infezzione avanzata à 6 mesi, cumparatu cù una risposta> 489 pg/mL.ml di IFN-γ anu un risicu di infezione di 5,4% (table 2).
A prova di sangue sanu venoso hè limitatu in u scopu per a necessità di raccolta di campioni da u flebotomista.Per aumentà a dispunibilità di e teste di cellule T è IgG per SARS-CoV-2, un metudu alternativu di campionamentu di sangue capillare hè statu sviluppatu per permette à i participanti di ottene campioni di sangue in casa.À u megliu di a nostra cunniscenza, ùn ci sò micca stati rapporti previ nantu à a misurazione di a funzione di e cellule T antigene specifiche in campioni di sangue capillari.Una forte correlazione hè stata prima dimustrata trà i cunti di linfociti ottenuti utilizendu campioni di sangue capillari è venoso paragunabili.Inoltre, hè statu infurmatu chì i saggi basati in sangue interu chì misuranu e risposti di e cellule T specifiche di SARS-CoV-2 usanu solu 320 μL di sangue venoso, 20 eliminendu preoccupazioni per a frequenza di e cellule T progenitrici in campioni di sangue capillari.
Avemu utilizatu stu esame di cullaburazione standardizatu à altu rendimentu di e cellule T SARS-CoV-2 è anticorpi IgG basati in sangue capillare tutale per misurà a risposta immune cellulare è umorale in i participanti cù diverse comorbidità è status di vaccinazione / infezione precedente (Tabella 1).recrutati da tuttu u Regnu Unitu trà u 24 di ghjennaghju è u 14 di marzu di u 202214. A maiuranza (90,9%) di i campioni di dita sò stati ottenuti currettamente è mandati à u laboratoriu in 24 ore di cullizzioni.In certi casi, i campioni sò stati ricivuti in l'ora di 48 di u sangue, ma nimu di sti campioni passavanu cuntrolli di cuntrollu di qualità è ùn anu micca affettatu in generale di e misure di cellule T o di anticorpi (Figura Supplementaria 5).Ancu s'ellu ci era differenze in a magnitudine di a risposta di l'IFN-γ+ T specificu di SARS-CoV-2 misurata in campioni di sangue capillari è venoso rispettivi in ​​certi individui, ùn ci era micca differenze significative in generale (P = 0.88; Supplementary Fig. 6). ).).
I risposti di i celluli T IFN-γ+ specifichi di SARS-CoV-2 sò stati significativamente aumentati in individui vaccinati chì anu ancu riportatu una infezione precedente (P = 0,0001), ma micca significativamente più altu ch'è in individui donatori senza vaccinati previamente infettati (P ​​= 0,19, Fig. 3a).).I risposti IgG contr'à a glycoprotein spike (RBD, S1, S2) eranu significativamente più altu in i donatori vaccinati cà in i donatori micca vaccinati, indipendentemente da u statu di infezione precedente (Figura 3b-d).Curiosamente, a risposta media di l'IgG N-bound era più altu in i participanti micca vaccinati precedentemente infettati cumparatu cù i participanti vaccinati, ancu s'ellu ùn hà micca righjuntu significatu (Figura 3e).Trà i donatori micca vaccinati è micca infettati chì si dichjaranu, 15 di 37 (40.5%) participanti eranu pusitivi per l'IgG N-linked, sopra à u limitu stabilitu prima di 2.0 BAU/mL14;sti participanti 15 Dodici di questi pazienti anu pruvatu pusitivu per a risposta di e cellule T IFN-γ+ sopra u sogliu stabilitu prima di 22,7 pg/mL IFN-γ14.Dunque, hè prubabile chì questi participanti eranu previamente infettati da SARS-CoV-2 è ùn sò micca stati testati per COVID-19 per via di a scelta persunale, a mancanza di PCR è / o l'equipaggiu di flussu laterale, o eranu asintomatici.Ancu s'ellu ci era una correlazione significativa trà e risposte di e cellule T à l'IFN-γ+ è i livelli di IgG N-linked in donatori non vaccinati (P ​​= 0,0044; Figura supplementaria, a risposta IgG N-linked diminuì più rapidamente di a risposta IgG N-linked, mentri IFN-γ). + I risposti di e cellule T sò stati mantinuti indipendentemente da u statutu di vaccinazione, ancu s'è u numeru di donatori à 50 settimane post-sfida era bassu (Figura supplementaria 8). U tipu di vaccinazione era generalmente pocu sfarente in risposti IgG osservati specifichi per SARS-CoV-2, T. cellule è RBD-associate, anche se i participanti chì anu ricivutu duie dosi di BNT162b2 seguite da revaccinazione mRNA1273 anu dimustratu livelli significativamente più alti di cellule IFN-γ + T eranu più sensibili à SARS-CoV-2 cà quelli chì anu ricevutu duie dosi di ChAdOx1 è BNT162b2 (Supplementariu). Fig. 9) Inoltre, i comorbidità riportati avianu poca differenza generale in i risposti di e cellule T osservati cumparatu cù i donatori sani (Figura Supplementaria 10).
una risposta di l'IFN-γ+ T specificu di SARS-CoV-2 hè stata misurata da un test di capillarità di sangue tutale è basata nantu à i vaccinazioni di i participanti è u statu infettivu SARS-CoV-2 precedente (cunfirmatu da PCR è / o test di flussu laterale)."Vac + /Inf +" n = 42 (verde), "Vac + /Inf-" n = 158 (blu), "Vac-/Inf +" n = 33 (giallo), "Vac- /Inf-" n = 37 (grigiu).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac-/Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2 reazioni di legame IgG specifiche à u duminiu di legame di u receptore di spike ("RBD") (b; ****P <0.0001, ns: micca significativu), subunità di spike 1 ("S1") (c; * * ** P < 0,0001, ns: micca significativu), subunità spike 2 ("S2") (d; **** P < 0,0001, *** P = 0,0005, * P = 0,016) è nucleocapside ("N") (e; ****P < 0.0001, ns micca significativu) sò stati misurati cù l'analisi di sangue venoso è basatu annantu à i vaccinazioni di i participanti è u SARS-CoV-2 precedente (cunfirmatu da PCR è / o analisi di flussu laterale) L'infezioni sò stati suddivisi da statutu."Vac + /Inf +" n = 46 (verde), "Vac + /Inf-" n = 182 (blu), "Vac-/Inf +" n = 34 (giallo), "Vac-/Inf-" n = 37 (grigiu).I paraguni sò stati fatti cù a prova Kruskal-Wallis, aghjustatu per parechje paraguni cù a prova Dunn.I dati sò affissati cum'è grafici (linea centrale à a mediana, limitu superiore à u 75 percentile, limitu minimu à u percentile 25) cù i baffi à i valori minimi è massimi.Ogni puntu rapprisenta un donatore.I dati crudi sò furniti in forma di schedarii di dati crudi.
Cum'è prima, i participanti sò stati dumandati à rapportà risultati pusitivi di PCR è / o di u flussu di sangue laterale per COVID-19;secondu l'Agenzia di Salute di u Regnu Unitu, i participanti sò presumitu chì sò stati infettati da u coronavirus Omicron (B.1.1.529) à u mumentu di a prova di a variante di virus pusitivu, postu chì era a variante dominante in u Regnu Unitu durante u periodu di studiu.Trà 299 donatori evaluabili, avemu osservatu una rata di infezzione di 8.0% (24/299) in trè mesi di donazione capillare, sette di quali ùn eranu micca vaccinati.A proporzione di comorbidità trà tutti i participanti era più bassu in quelli chì anu pruvatu pusitivu per COVID-19 (10.7%) cà quelli chì anu testatu negativu per COVID-19 (24.4%, Tabella 1), chì pò esse dovutu à u fattu chì i participanti cù certi e malatie sò più attenti è prutegge da e cunsequenze potenziali cum'è a diabetes è u cancer.Cum'è osservatu in una coorte di sangue venoso, i linfociti T positivi per l'interferone-γ (IFN-γ)-specificu per SARS-CoV-2 misurati in campioni di sangue capillare da individui chì riportanu un test diagnosticu pusitivu per COVID-19.A magnitudine di a risposta era significativamente più bassa chè in i donatori non infettati (P ​​= 0.034; Figura 4a) per via di l'induzione relativamente povera di una risposta di cellule T da vaccinazione è / o infezzione precedente (Figura Supplementaria 11).In listessu modu, nè risposti di l'IgG RBD-, S1-, S2-binding (Figures 4b-d) nè RBD-, S1-neutralizing anticorpi risposti eranu specifichi per u salvaticu o delta SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Figura supplementaria 12).L'individui à qualsiasi risicu significativu di infezzione ponu esse identificati.In cuntrastu à a cohorte venosa, e risposte IgG ligati à l'N ùn differenzianu ancu u risicu di COVID-19 (Figura 4e), suggerendu chì a variante Omicron (B.1.1.529) aumenta l'evasione immune in individui previamente infettati, cum'è descrittu recentemente 21. In cuntrastu, a forza di a risposta di e cellule T IFN-γ specifichi di SARS-CoV-2 hè stata di novu a variabile più impurtante in a determinazione di probabilità individuali di teste pusitivi per COVID-19 (Figura 4f).In generale, i participanti cù una risposta capillare T-cell specifica SARS-CoV-2 ≤23.7 pg/mL IFN-γ anu avutu un risicu di 14.9% d'infezzione à trè mesi paragunatu à una risposta> 141.6 pg/mL.ml IFN.-γ avait un risque d'infection de 4,4 % (tableau 2).
Risposte di cellule T IFN-γ+ specifiche per SARS-CoV-2 (a; * P = 0,034) e per il dominio specifico di legame al recettore (RBD) IgG specifico per SARS-CoV-2 (b), subunità di punta 1 (' S1′) (c), subunità spike 2 ('S2') (d) e reazione di legame nucleocapside ('N') (e).I participanti identificati cum'è pusitivi per i testi COVID-19 (PCR è / o test di flussu di sangue laterale), tutte l'infezioni sò accadute in 3 mesi da u prelievu di sangue.I paraguni sò stati fatti cù una prova di Mann-Whitney à duie code.I dati sò affissati cum'è grafici (linea centrale à a mediana, limitu superiore à u 75 percentile, limitu minimu à u percentile 25) cù i baffi à i valori minimi è massimi.Ogni puntu rapprisenta un donatore.ns ùn hè micca impurtante.A heatmap f mostra a correlazione di u rangu di Spearman trà e variàbili per u dataset specificatu.I paraguni chì ùn sò micca stati statisticamente significativi sò stati esclusi da a matrice è marcati cù cellule in biancu.I dati crudi sò furniti in forma di schedarii di dati crudi.
Mentre passemu in a prossima fase di a pandemia di COVID-19, l'enfasi si trasfererà da a prevenzione à a gestione di i risichi individuali è à l'identificazione di i membri vulnerabili di a sucità.Stabbilimentu di correlati di l'immunità à COVID-19 hè criticu per identificà è trattà in modu efficace questi gruppi à altu risicu.Ci hè avà una evidenza crescente chì l'immunità di e cellule T pruteghja contra l'infezione SARS-CoV-2 è limita a gravità di COVID-1910.I dati presentati quì dimustranu chì a forza cumminata di e risposti di e cellule T IFN-γ+ specifiche di SARS-CoV-2 contr'à e proteine ​​​​strutturali di spike, membrana è nucleocapsid conferisce una prutezzione più grande contr'à COVID-19 cà l'anticorpu vincule.19 prumove o neutralizà e risposte. .è deve esse cunsideratu quandu valutà l'immunità individuale è / o di gregge.I virus RNA cum'è SARS-CoV-2 o virus di l'influenza A (IAV) evitanu a neutralizazione serologica da l'evoluzione rapida di epitopi di cellule B esposti in antigeni di superficia ricunnisciuti da l'anticorpi.A risposta immune protettiva furnita da e cellule T pò riflette u targeting di epitopi da regioni più cunservate di proteine ​​​​virali chì ùn ponu micca scappà rapidamente una risposta immune.A prutezzione mediata da e cellule T contr'à e novi varianti SARS-CoV-2 hè simile à a prutezzione eterosubtipica mediata da l'orientazione di e cellule T di proteine ​​​​intrinseche conservate vedute in i sottotipi IAV22,23.
Malgradu l'enorme potenziale per a misurazione di a risposta immune cellulare à COVID-19, relativamente poca attenzione hè stata pagata à u sviluppu di saggi di cellule T precisi, d'alta produzzione, standardizati.E cumplessità tradiziunali è i costi assuciati à a misurazione di e risposte di e cellule T impediscenu a determinazione precisa di l'immunità di e cellule T in u screening per l'immunità di a grande populazione.Mentre chì parechji saggi cummirciali di stimulazione di peptide di sangue sanu sò diventati recentemente dispunibili, tutti oghje necessitanu un flebotomista per ottene sangue, limitendu a dispunibilità è a scala.I sistemi di sangue capillari sò largamente usati per determinà a prevalenza di l'anticorpi SARS-CoV-2 in una populazione.Avemu adattatu l'analisi di sangue capillare per eseguisce saggi di stimolazione di peptidi di sangue interu per valutà a reattività di e cellule T à e proteine ​​​​strutturali SARS-CoV-2 è risposte di anticorpi specifici SARS-CoV-2.In fattu, a misurazione cumminata di l'anticorpi specifichi SARS-CoV-2 è e cellule T in u stessu campionu di sangue capillare hè assai attraente: (i) riduce a necessità di parechje teste di sangue per participante, (ii) migliurà l'esperienza è a capiscitura di i participanti;(iii) migliurà a logistica è riduce a duplicazione, (iv) riduce l'impattu ambientale postu chì menu consumabili di laboratoriu è consegna di campioni sò richiesti.Ancu s'è a reattività generale di l'IFN-γ era simile trà i campioni di sangue venoso è capillare, hè statu osservatu per esse più bassu in a cohorte di u sangue di i participanti (Fig. 4a) cumparatu cù a cohorte di sangue venosa (Fig. 2a).Valori di IFN-γ Ci sò parechje spiegazioni per questa scuperta, à dì, un gran numaru di participanti cù comorbidità chì necessitanu terapia immunosoppressiva sò stati recrutati in a cohorte di campionamentu di sangue capillare (Tabella 1) è Viabilità è / o funzione di i linfociti T ottenuti da vascular. campioni pò esse bassu, soprattuttu piglià in contu i cundizioni di u almacenamentu longu di campioni nanzu stimulation peptide.
A vacuna COVID-19 attualmente largamente dispunibule furnisce a megliu prutezzione contra a malatia severa per a maiò parte di i destinatari in 6 mesi da a vaccinazione8.Incoraggiante, malgradu a cattiva neutralizazione serologica indotta da a vacuna di e varianti SARS-CoV-26,7, e risposte di e cellule T suscitate da a vaccinazione contr'à SARS-CoV-2 di tipu salvaticu sò rimaste assai reattive, cum'è 25 altri emergenu.I dati chì presentemu quì dimustranu l'impurtanza di una valutazione più larga di l'immunogenicità di i vaccini, mettendu in risaltu i vaccini cù l'immunità insufficiente di e cellule T per prevene l'infezzione brusca è a trasmissione persistente di u virus.Avemu ancu osservatu chì parechji individui micca vaccinati reclutati in a coorte capillare anu avutu una risposta significativa di e cellule T specifiche di SARS-CoV-2 (è IgG N-binding) indipendentemente da a vaccinazione precedente, chì hè prubabilmente dovuta à l'infezione precedente.Piuttostu chè vaccinate individui apprupriati, u so risicu d'infezzione deve esse valutatu basatu annantu à u so status di immunizazione attuale è e scelte infurmate fatte.
I limitazioni di stu studiu includenu l'assicuranza chì i participanti anu auto-riportatu infezzione cù SARS-CoV-2 dopu a cullizzioni di sangue per determinà a rilevanza di l'immunità;certi participanti ponu avè infezzione asintomatica è ùn ponu micca sottumessi à PCR è / o teste di flussu laterale per COVID-19.U nostru set di dati mancava ancu infurmazione nantu à i medicazione di i participanti à u mumentu di u campionamentu di sangue.Inoltre, datu chì tutti i nostri participanti anu riportatu solu sintomi ligeri / moderati o senza sintomi, ùn era micca pussibule identificà risposti immune da u nostru settore di dati chì predichevanu un risicu aumentatu di malatie severi è hospitalizazione per COVID-19.Tuttavia, a prisenza di risposti di cellule T CD8 + contr'à epitopi specifichi di nucleocapsid hè stata recentemente assuciata à a prutezzione contra COVID-1926 severu.Inoltre, l'assay utilizatu quì ùn hà micca misuratu e risposte di e cellule T à specifiche proteine ​​​​non strutturali SARS-CoV-2 espresse prima chì sò state recentemente dimustrate per accumulà preferenzialmente in i travagliadori sanitari seronegativi chì sò stati in cuntattu cù pazienti infettati.Basatu annantu à stu travagliu, datu a prevalenza di a trasmissione di a cumunità à u mumentu di u reclutamentu è l'alta probabilità di infezzione di cuntattu in a pupulazione, u numeru di cellule T specifiche SARS-CoV-2 truvate in i nostri testi pare ancu esse capace di sbulicà.infezioni subcliniche in i nostri cohorts.Infine, ùn avemu micca misuratu a produzzione di interleukin 2 da e cellule T perchè u nostru travagliu precedente hà dimustratu una cattiva identificazione di risposti specifichi di e cellule T SARS-CoV-214, anche se e risposte specifiche à IL-2 ponu indicà una reattività incruciata preesistente.cellule assuciate à a difesa contr'à l'infezione SARS-CoV-211.
Inseme, sti dati mettenu in risaltu a necessità fundamentale di studii longitudinali à longu andà chì incorporanu risposti specifichi di e cellule T SARS-CoV-2 in misure di immunità à scala di pupulazione.Questi sforzi ponu esse aiutati da u sviluppu di una nova prova di sangue capillare chì misura a risposta di e cellule T.
U prughjettu di ricerca hà recrutatu i participanti da u ferraghju 2021 à u marzu 2022. A cohorte di donatori sani (n = 148) chì anu donatu campioni di sangue venoso era principalmente di u persunale universitariu è di i studienti chì participanu à u serviziu di screening COVID-19 di l'Università di Cardiff o di u persunale in una scola primaria in Cardiff.Tutti i participanti eranu altrimenti sani è ùn anu micca infurmatu di piglià alcuna droga immunosuppressiva (vede a Tabella 1 per e caratteristiche).A cohorte di participanti chì anu donatu campioni di sangue capillare includenu tutti i donatori voluntari (età 18+) da tuttu u Regnu Unitu.Trà u 24 di ghjennaghju è u 14 di marzu di u 2022, 342 participanti sò stati iscritti à u studiu, di i quali 299 anu sottumessu campioni di sangue à u laboratoriu.Parechji participanti ùn anu micca vaccinatu è / o anu riportatu comorbidità serii, cumprese e malatie autoimmune è u cancer (vede a Tabella 1 per e caratteristiche).Stu studiu hà ricevutu appruvazioni etiche da u Cumitatu d'Etica di Ricerca di Newcastle è North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) è u Cumitatu d'Etica di Ricerca di a Scuola di Medicina di l'Università di Cardiff (SREC ref: SMREC 21/01).Tutti i participanti anu datu un accunsentu infurmatu scrittu prima di l'inclusione.I participanti ùn anu micca ricevutu alcuna compensazione per participà à stu studiu.
I campioni di sangue venoso sò stati ottenuti per venipuncture in 6 o 10 ml di lithium o sodium heparin vacutainers (BD).I campioni di sangue capillari sò stati ottenuti cù una lancetta di dita è dopu raccolti in microcontainers di eparina (BD).Un minimu di 400 µl di sangue hè necessariu;ogni mostra menu di sta quantità serà rifiutata.L'altri ragiuni per u rifiutu di mostra includenu coagulazione massiva è / o hemolysis è fallimentu di cullà u plasma viscosu per l'analisi (Figura Supplementaria 5).Un totale di 299 campioni di sangue capillare eranu dispunibili per a valutazione di e risposte di l'anticorpi, di quale 270 campioni eranu ancu dispunibili per a valutazione di e risposte di e cellule T.
I risposti specifichi di e cellule T SARS-CoV-2 sò stati valutati cù l'assay Immuno-T COVID-19 (ImmunoServ Ltd) è eseguite cum'è descrittu prima14.In breve, un vacutainer venoso di 6 ml o 10 ml di heparina di sodiu (BD) hè statu pigliatu da ogni participante è processatu in u laboratoriu in 12 ore da a raccolta di sangue.Ancu se a maiò parte di i campioni sò stati processati in 24 ore, un sangue capillare di microbleeding eparinizatu (BD) di 400-600 μl hè statu recullatu in 48 ore di campionamentu di u dito.I campioni di sangue venoso è / o capillare sò stati stimulati cù pools di peptidi separati specifichi per SARS-CoV-2 (variante di tipu salvaticu) cum'è descrittu prima14.Questa libreria di peptidi cuntene 420 sequenze 15-mer cù 11 aminoacidi sovrapposti chì copre l'intera proteina spike (S1 è S2) (S; proteina NCBI: QHD43416 1), fosfoproteina nucleocapside (NP; proteina NCBI: QHD43423 2) è glicoproteina di membrana (M) ; Proteina NCBI: QHD43419 1) sequenze codificanti (denominate "Biblioteca di peptidi combinatori S-/NP-/M").Tutti i peptidi sò purificati à> 70%, dissoluti in acqua sterile è utilizati à una cuncentrazione finale di 0,5 μg / ml per peptide.I campioni sò stati incubati à 37 ° C per 20-24 ore.I tubi sò stati poi centrifugati à 5000 × g per 3 minuti è ~ 150 µl di plasma sò stati cullati da a cima di ogni campione di sangue.Conservate i campioni di plasma à -20 ° C per un mesi prima di eseguisce analisi di rilevazione di citochine/anticorpi.
L'IFN-γ a été mesuré à l'aide de l'IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, numéro de catalogue 430116) et effectué selon les instructions du fabricant.Immediatamente dopu chì a suluzione di stop (2N H2SO4) hè stata aghjunta, a micropiastra hè stata letta à 450 nm cù un lettore di piastre BioLegend Mini ELISA.L'IFN-γ a été quantifié par extrapolation de courbe standard utilisant GraphPad Prism.I valori sottu à u limitu di detezzione più bassu di l'analisi sò stati registrati cum'è 7,8 pg/ml, i valori sopra u limitu di rilevazione superiore di l'analisi sò stati registrati cum'è 1000 pg/ml.
L'anticorpi IgG Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N sò stati misurati cù un pannellu 4-plex Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 (Bio-Rad, cat. n. 12014634) è marcatu secondu istruzioni di u fabricatore.istruzioni.I campioni chì riportanu i valori sopra u limitu di quantificazione sò stati rianalizzati à una diluzione 1: 1000.L'intensità media di fluorescenza di e perle hè stata misurata nantu à un strumentu Bio-Plex 200 (Bio-Rad).A cuncentrazione di l'anticorpu hè stata calculata da l'analisi di cuntrollu unicu VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) è cunvertita à l'OMS / NIBSC 20/136 International Reference Standard Units (BAU/mL) utilizendu u fattore di calibrazione di u fabricatore.
L'anticorpi neutralizzanti specifichi di subunità RBD è S1 contr'à SARS-CoV-2 wild-type è delta (B.1.617) SARS-CoV-2 sò stati misurati cù u Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio). -Rad , parte n. 12016897), secondu l'istruzzioni di u fabricatore.Misura l'intensità di fluorescenza media nantu à u Bio-Plex 200 (Bio-Rad) è calculate u percentualità di inibizione (vale à dì, neutralizazione) cù a seguente formula:
I saggi di neutralizazione infettiva per SARS-CoV-2 sò stati realizati cum'è descrittu prima28.In breve, 600 PFU di SARS-CoV-2 di tipu salvaticu sò stati incubati cù diluzioni seriali di 3 volte di plasma in duplicate per 1 ora à 37 ° C.U mischju hè statu aghjuntu à e cellule VeroE6 per 48 ore.Monolayers sò stati fissi cù 4% paraformaldehyde, permeabilized cù 0.5% NP-40 è incubate per 1 ora in tampone di bloccu (PBS chì cuntene 0.1% tween è 3% latte scremato).L'anticorpu primariu (anti-nucleocapsid 1C7, Stratech) hè statu aghjuntu à u buffer di bloccu per 1 ora à a temperatura di l'ambienti.Dopu à lavà, un anticorpu secundariu (anti-mouse IgG-HRP, Pierce) hè statu aghjuntu à u buffer di bloccu per 1 ora.I monostrati sò stati lavati, sviluppati cù Sigmafast OPD è leghje nantu à un lettore di piastra Clariostar Omega.I pozzi senza virus, senza virus ma senza anticorpi, è i serii nurmalizzati chì mostranu attività intermediate sò stati inclusi in ogni esperimentu cum'è cuntrolli.
L'analisi statistiche hè stata realizata in GraphPad Prism (versione 9.4.1).A normalità di u settore di dati hè stata pruvata cù a prova Shapiro-Wilk.I criterii non parametrici sò stati usati per tutti i paraguni.A prova di Mann-Whitney hè stata aduprata per i campioni senza pari.Tutti i testi eranu bifacciali cù un limitu di significazione nominale di P ≤ 0.05.
L'analisi esplorativa iniziale di u dataset hè stata fatta in R (versione 4.0.3).Questu include u sviluppu di a matrice di correlazione univariata di Spearman, induve a correlazione trà duie variàbili hè rapprisintata da a dimensione è u culore di i quadrati.A significazione statistica trà l'associazioni hè stata calculata cù u rho di Spearman, induve i valori ≤0.05 sò stati cunsiderati significativi.I paraguni chì ùn sò micca stati statisticamente significativi sò stati esclusi da a matrice è marcati cù cellule in biancu.I valori P sò stati aghjustati per parechje paraguni cù a correzione di Holm.Un mudellu di regressione logistica binaria hè stata utilizata per simulà l'effettu di e variabili in u dataset nantu à a risposta positiva à COVID-19.Les réponses des cellules T à l'IFN-γ et les scores du titre IgG anti-RBD/S1/S2/N ont été convertis en facteurs, où chaque individu était assigné au quartile approprié pour chaque score.Dopu quì, un mudellu di ricerca iniziale hè statu sviluppatu cù a funzione glm in u pacchettu statisticu (V4.0.3).I rapporti di probabilità derivati ​​da stu mudellu originale sò stati estratti da i coefficienti di u mudellu cù a funzione "odds_plot" in u pacchettu OddsPlotty (V1.0.2).Quandu hà sviluppatu u mudellu di validazione incruciata, avemu usatu a funzione "bestglm" da u pacchettu bestglm (V0.37.3) per limità u preghjudiziu di l'utilizatori è assicurà chì u megliu sottumessu di predittori pò esse sceltu.U metudu sceltu era "esaustivu" è u criteriu d'infurmazione utilizatu per valutà l'adattazione di u mudellu era AIC.U stessu flussu di travagliu descrittu sopra hè stata utilizata per ottene u rapportu di probabilità.
Per più infurmazione nantu à u disignu di studiu, vede l'astrattu di studiu di Natura ligatu à questu articulu.
E lettere è e dumande di materiale devenu esse dirette à u duttore Martin Scarr o à u prufessore Andrew Godkin.Questu articulu furnisce i dati originali.
U codice R utilizatu per creà mudelli statistichi hè dispunibule publicamente senza dumanda29.L'infurmazioni di ristampa è e licenze ponu esse truvate in www.nature.com/reprints.
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